影响质粒DNA细胞转染效率的原因

影响质粒DNA细胞转染效率因素

1、质粒大小和转染量：在一般情况下，随插入片段长度的增加转染效率降低；而转染效率在一定的范围内与质粒转染量呈正相关。

2、DNA质量：高质量的DNA对于转染的效率至关重要。如果质粒不纯会显著影响转染复合物的形成，进而影响转染效率。因此，可以选择提取纯度较高的试剂盒对DNA进行提取和纯化，以得到更高质量的DNA，从而提高转染效率。

3、转染试剂的选择：转染试剂将外源核酸片段导入细胞，影响内源基因表达水平。在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂，例如在绵羊成纤维细胞转染过程中FuGene HD的转染效率更高，GenEscortTM I对小鼠胶质细胞则具有更好的转染效果。总之，可以遵循高效、低毒等原则进行选择。

4、质粒与转染试剂比例：在一定范围内，转染效率与质粒/转染试剂比值成正相关，但毒性也会增加。可以根据转染试剂推荐比例确定合适的合适的转染比例。

5、细胞状态：维持细胞生长及健康旺盛是提高转染效率的重要条件。建议选择对数生长期的细胞为佳，此时期的细胞生长旺盛，可能得到更高的转染效率，切勿选择传代次数过多，基因型可能发生改变的细胞。

6、细胞密度：细胞密度过高或过低都会影响转染效果，过高则难以转染，过低则容易导致细胞死亡，因此需要选择合适的细胞融合密度进行转染，一般来说细胞密度在60%-80%时转染较为理想，但具体密度可参考转染试剂的说明书进行操作。

7、血清：血清中含有大量的蛋白质，可能会降低转染效率。一般的转染试剂会要求转染时使用无血清培养基进行转染，转染完成后更换完全培养基。但现在有些新的转染试剂血清的存在已不造成威胁，甚至还有助于提高转染效率，如阳离子聚合物等。

8、抗生素：抗生素，如青霉素和链霉素，一般是作为培养基中的添加物来防止细胞污染。这些抗生素对于真核细胞没有毒性，但是转染时有些转染试剂增加了细胞的通透性使抗生素进入细胞，可能会间接导致细胞死亡，从而降低转染效率。可以根据转染试剂的要求来选择是否在培养基中添加抗生素。

质粒DNA细胞转染注意事项

线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。

如果你的质粒正好比较大，又没有经验，选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些促进DNA凝聚的成分，使得DNA形成转染复合物时更致密一些，更容易转染一些。纯化质粒的质量也会影响转染效率，一定要选择高质量的质粒。