革兰氏染色配制及染色方法实验步骤

实验方法原理：本染色法是最基本的染色法，可使用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。

实验步骤    

一、实验试剂：

1. 结晶紫溶液：

A液：结晶紫：2g，95%乙醇：20ml。

B液：草酸铵：0.8g，蒸馏水：80ml。

需在用前24小时将A液. B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用。

2. 碘液：

碘：1g，碘化钾：2g蒸馏水：300ml。

出碘与碘化钾混合并研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解，然后研磨，继  续加入少量蒸馏水至完全溶解，最后补足水量。

也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。

3. 脱色液：95%乙醇。

4. 复染液：

A.贮存液：沙黄：2.5g，95％乙醇：100ml。

B.应用被：A液：10ml，蒸馏水：90ml。

菌片制备：染色的第一步是制作涂片。菌液涂片时，用接种环蘸取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布，菌落涂片时，先取生理盐水1滴，置玻片上，用接种针挑去菌落，在盐水中涂布。涂片时必须注意应轻轻操作。猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不易过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。将固定后的涂片进行染色。

二、染色方法：

l. 涂片经火焰固定，加结晶紫液染1min，清水冲去染液。

2. 加碘液染1min，水洗。

3. 加脱色液，不时摇动约30秒，至无紫色脱落为止，水洗。

4. 加复杂液，染30秒，水洗。

5. 干后镜检。