人抗类固醇细胞抗体(SCA)ELISA试剂盒注意事项

本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人抗类固醇成细胞抗体(SCA)的含量。
有效期：6个月
保存条件：2-8℃
 
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人抗类固醇成细胞抗体(SCA)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗类固醇成细胞抗体(SCA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样本处理及要求
1.  血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.  细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

需要而未提供的试剂和器材
1.     酶标仪（450nm）
2.     高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.     37℃恒温箱
4.     蒸馏水或去离子水
 
试剂盒问题解析：
1.试剂的选择：选择优良试剂大家都是知道的，但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻。
2.加样中可能遇到的问题：在做血清或是血浆用于检测试剂的时候，会碰到血清血浆不好分离的情况，这个时候的解决办法是先放在常温中1到2小时，然后在进行离心处理
3.洗板时容易造成误差： 因为洗板是人工洗的，所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的，这个时候带有主观色彩，所以多清洗几次，还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动
4.显色问题： 使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长，都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候，要先查看显色剂本身的情况
5.终止反应：在加终止剂的时候由于倾倒速度快，差生气泡，造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒
6.读板：读板的时候首先应该保证板的清洁干净

试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
 
操作步骤
1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.  样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
 
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
 
试剂盒性能
1.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
2.  重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。