菌种保藏及活化使用注意事项

菌种保藏的方法很多，但原理大同小异。首先要挑选优良纯种。利用微生物的孢子、芽孢及营养体；其次，根据其生理、生化性，人为创造低温、干燥或缺氧等条件，抑制微生物的代谢作用，使其生命活动降低到极低的程度或处于休眠状态，从而延长菌种生命以及使菌种保持原有的形状，防止变异。不管采用哪种保藏方法，在菌种保存过程中要求不死亡、不污染杂菌和不退化。
 
短期：斜面保藏

斜面保藏是目前最普遍的短期保藏法，操作简单，使用方便，但需定期接种。因此工作量较大，而且传代次数多易发生变异，因此，仅适用于短期经常使用的菌种。

1. 配制培养基，营养成分浓度稍低为宜，特别是糖类尽可能降低，产酸菌种，则应添加少量碳酸钙；

2. 斜面装液量，斜面以倾斜后不超过试管长度 1/2 为宜；

3. 斜面培养，温度较最适稍低，时间较最适略长；

4. 生长完成后，密封置于 2~8℃的冰箱中保藏。每传代一次，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌可保存 1~3 个月，酵母菌 2 个月，细菌1个月。

活化使用：

将斜面从冰箱中取出，细菌挑取菌落增菌，或霉菌切块传代培养，培养好即可使用。

长期：冷冻保藏

冷冻保藏是目前使用较为广泛的长期保藏法之一，适用于所各类微生物，较之于斜面保藏，减少了工作量，延长了保藏时间。

1. 准备斜面或平板新鲜培养物一个，10%的无菌甘油溶液；

2. 用甘油溶液将菌体或孢子洗脱下来，形成菌悬液；

3. 菌悬液分装，冻存管装液 1mL/支，后置于程序降温盒；

4. 将程序降温盒置于-80℃冰箱冻存；

5. 可保藏 1-2 年。

活化使用：

1. 将冻存菌株置于冻存盒中取出，准备水浴溶解，切勿常温融化；

2. 将菌株迅速置于水浴速溶，细菌 40℃，真菌 30℃，约 2min 全部溶解后接种到适宜培养基；

3. 采用适宜条件培养完成即可。