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【结缔组织染色】弹力纤维与胶原纤维染色实验

2024-08-15 9:42 来源:上海远慕生物试剂

实验方法原理

弹力纤维由随机交联盘绕的一些肽链组成,含有丰富的二硫键糖蛋白成分,所以可称为弹性蛋白。易与染色液中碱基结合,为了能够更好地显示弹力纤维和胶原纤维成分,选用维多利亚蓝、丽春红和苦味酸组合双重染色方法。

实验材料

石蜡组织切片

试剂、试剂盒

维多利亚蓝 糊精 间苯二酚 蒸馏水 乙醇 三氯化铁水溶液 浓盐酸 苯酚二甲苯 中性树胶

仪器、耗材

60 ℃恒温箱 滤纸

实验步骤

维多利亚蓝染色液:维多利亚蓝(Victoria blue2 g,糊精 0.5 g,间苯二酚 4 g,蒸馏水 200 ml。将上述物质混合后加热煮沸,边煮边搅拌,约 5min。然后用另一容器取 30 三氯化铁水溶液 25 ml,另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中,继续煮沸 3 min,不断搅拌溶液呈胶冻状。去火,冷却过滤,将滤纸上的残渣连同滤纸一起放在 60℃ 恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末,再将其溶于 400 ml 70 乙醇液中。然后加浓盐酸 4 ml 和苯酚 5 g,放置至成熟后使用。

 

 

1. 石蜡组织切片,常规脱蜡至水。

 

2. 切片入 70 乙醇中洗 2 min

 

3. 将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染 25 h

 

4. 直接入 95 乙醇中分色数秒钟。

 

5. 用蒸馏水洗 2 min

 

6. 用丽春红-苦味酸染色液滴染切片 3 min

 

7. 直接用无水乙醇冲洗多余染色液 2 次。

 

8. 二甲苯透明和中性树胶封固。

注意事项

 

1. 维多利亚蓝染色液可在室温中存放较长时间,染色液浸染后倒回原处,可反复使用。

 

2. 95 乙醇分色后,立即浸入水中,可用显微镜观察染色程度,如果较浅或较深,可再重复染色或分色。

其他

结果:弹力纤维呈蓝绿色,胶原纤维呈红色,背景呈黄色。

 

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