人抗腮腺管抗体(anti-parotid duct Ab)elisa试剂盒检测原理

人抗腮腺管抗体(anti-parotid duct Ab)elisa试剂盒 检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)来检测样品的浓度。往预先包被捕获抗体的包被微孔中，依次加入样本、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。再用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与检测样品中检测物的浓度呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中检测物的含量。

试剂盒组成
名称    48孔配置     96孔配置      保存
酶标板(可拆卸)    1×48      1×96    2-8℃
标准品    0.3ml×6管    0.3ml×6管    2-8℃
酶标试剂     5ml×1瓶     10ml×1瓶     2-8℃
样品稀释液    3ml×1瓶     6ml×1瓶    2-8℃
显色剂A液       3ml×1瓶    6ml×1瓶    2-8℃
显色剂B液     3ml×1瓶    6ml×1瓶    2-8℃
终止液    3ml×1瓶    6ml×1瓶    2-8℃
20倍浓缩洗涤液    15ml×1瓶    25ml×1瓶    2-8℃
封板膜      2片     2片     
密封袋      1个      1个      
说明书      1份     1份     

试验所需自备物品
1.酶标仪(450nm波长滤光片)
2.高精度移液器，EP管及一次性吸头
3.37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
4.吸水纸

操作步骤
1.标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。
4.温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
5.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
7.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
8.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
9.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。

注意事项
1.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
10．试剂盒保存：；2-8℃。
11．有效期：6个月