人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab)ELISA试剂盒实验步骤

人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab)elisa试剂盒 实验原理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab)水平。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被的微孔中依次加入人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab),再与 HRP 标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab)浓度。

Elisa试剂盒组成：
（1）结合物及标本的稀释液；
（2）洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；
（3）酶标记的抗原或抗体（结合物）；
（4）酶的底物；
（5）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），elisa试剂盒参考标准品和控制血清（定量测定中）；

操作步骤：
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。

人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab)Elisa试剂盒注意事项
1.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月
仅供科研使用，不用于临床诊断!