远慕教您如何分析高效液相色谱图
2024-10-08 10:41 来源:上海远慕生物试剂
高效液相色谱法,你可以简单地想象,固定相是一个多空海绵状的柱形结构,样品在孔洞中进进出出。因为各个物质的吸附能力不同,所以才会在色谱图中拉开距离。
色谱图,其实简单地讲,是一个横坐标是时间,纵坐标是电信号的二维图谱。
高效液相色谱法,你可以简单地想象,固定相是一个多空海绵状的柱形结构,样品在孔洞中进进出出。因为各个物质的吸附能力不同,所以才会在色谱图中拉开距离。
和实验相关的参数:
1、保留时间-也就是可以定性的数据参数
如果使用同样的色谱柱,同样的流动相,分析同样的样品,那么这个样品的保留时间,应该是固定的。不同保留时间的色谱峰,应该表现出的是不同的物质。如果你跑的是反相色谱,那么色谱峰越靠后,它对应物质的极性也就越小。
2、峰面积-也就是可以定量的数据参数
这是你在色谱图中可以读出来的参数,在同一个色谱条件下,同一个物质的浓度和峰面积是成正比的。也就是说,如果你配制1.0mg/ml的X物质,进样后峰面积是10000,那么,你配制0.5mg/ml的X物质,进样后峰面积差不多就是5000
3、波长-这个是可以顺利进行试验的前提条件
同一样品,同一方法,同一色谱柱,在不同波长的峰面积是不同的。一个物质指在某些特殊波长下有吸收。比如一个物质在210nm和254nm处有吸收。那么波长在280nm处可能无法检出该物质。所以一个实验方法开始时要进行波长扫描。