人高敏三碘甲状腺原氨酸(u-T3)ELISA试剂盒实验原理

试验原理:
ELISA检测试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。

试剂盒组成：


标本收集与试剂准备:
1.血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。待测样本应尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。
2.洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水）
3.标准品配制：取7个1.5ml离心管，分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。从第壹至七管中分别加入标准品/样品稀释液200ul。在第壹管中加入标准品溶液200ul，置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第六管中吸出200ul弃去，第七管为空白对照。
4.生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟，用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。
5.TMB显色液的配置：使用前10分钟，将TMB显色液A液和B液1：1混合，避光放置备用。
6.如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最糕值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)

自备物品
酶标仪（450nm）
高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒温箱

人高敏三碘甲状腺原氨酸(u-T3)Elisa试剂盒操作注意事项
试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
所有液体组分使用前充分摇匀。

洗板方法
手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步骤
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒声明
准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
灵敏度：最低检测浓度小于10 nmol/L。
特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
有效期：6个月

免责声明
试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。