常用固定液的性质、用途与配制说明

1．单一固定液的性质和用途

（1）乙醇（C2H5OH）（ethylalcohol）：又名酒精，可沉淀白蛋白、球蛋白、核蛋白，后者易溶于水，所以经酒精固定的标本对细胞核染色不良。酒精可溶解脂肪、类脂体，所以不能用酒精固定脂肪。酒精可沉淀肝糖，但仍可溶解于水，因此肝糖经酒精固定后不能在低于70％酒精中保存。单独固定使用酒精的浓度应为95—100％。无水酒精渗透力较差，并且能使组织收缩，在与醋酸、氯仿混合使用时，可增强它们的穿透力。酒精除固定作用外，还具有硬化和脱水的作用，固定后的组织可保存于70％酒精中，所以酒精在制片过程中用途很大。无水乙醇容易挥发，又容易吸收空气中的水分，所以瓶盖必须塞紧，为了吸去其中水分，最好在无水乙醇瓶内放入少量无水硫酸铜粉末。酒精是一种还原剂，不能与重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合使用。

（2）甲醛（HCHO）（formeldehyde）：是一种气体，溶于水成为甲醛水溶液或称福尔马林，一般使用浓度为10％福尔马林（formalin）液，其配法是取市售的甲醛液10ml与90ml蒸馏水混合即可，实际上其含量只有4％甲醛。这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。

甲醛不能沉淀白蛋白及核蛋白，但能与蛋白质化合。它是一种应用广泛，使用简单的固定液，具有穿透力强、固定均匀、组织收缩小、硬度适当，适用于一般器官组织的固定及保存。尤其对脂肪、神经组织固定效果较好。更适于病理组织的制片及大体积标本的保存，一般组织需固定24小时以上，固定后的组织可移入50％酒精中逐步脱水。

甲醛是一种强还原剂，不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合，因极易被氧化为甲酸。在配混合固定液时，如海利氏液等需临用前再加入，24小时后失效。

甲醛由于长期贮存，特别是低温气候，容易产生多聚甲醛，即溶液中的白色沉淀，在高温下又成为甲醛。不纯的甲醛易产生甲酸，使溶液变为酸性，影响核的染色。所以在备用的福尔马林中加入小量的醋酸钙、碳酸镁或大理石作为中和剂。可用下法配制10％中性甲醛溶液，pH为7.0左右：

40％甲醛100ml

蒸馏水900ml

磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）4.0g

磷酸氢二钠（Na2HPO4）6.5g

甲醛醋酸钙溶液：

40％甲醛10ml

醋酸钙2g

蒸馏水加至100ml

（3）醋酸（CH3COOH）（aceticacid）：纯醋酸在低温时结成冰状故又名冰醋酸，约在17℃时融化，能和水及乙醇混合。使用浓度为0.3—5％，它能很好地沉淀核蛋白，对染色质的固定效果很好。醋酸对染色体的保存能接近生活状态，因此在固定染色体的固定液中几乎都含醋酸。醋酸的穿透力很强。它能使组织膨胀，常与其他药剂配合使用，起抑制其他固定剂对组织收缩的作用。

醋酸破坏线粒体和高尔基体，所以在线粒体和高尔基体制片及固定液中都不用醋酸。

（4）苦味酸（C6H2（NO2）3OH）（picricacid）：是一种强酸，呈黄色结晶，溶于水、乙醇、苯和二甲苯。干燥时能自燃，爆炸，所以需湿性保存。一般配成饱和水溶液备用（100ml蒸馏水加1.2g苦味酸）。

苦味酸能沉淀蛋白质，对胞质固定较好。苦味酸的穿透力很慢，能使组织强烈收缩，一般都与醋酸等药剂配合使用。苦味酸固定的组织会出现黄色，可在低度酒精中加入少量碳酸锂饱和水溶液，洗去黄色。如遗留少许黄色在组织中，对染色无影响。

（5）重铬酸钾（K2CrO7）（potassium dichromate）：呈橙红色结晶，可溶于水，有毒，是强氧化剂，不应和乙醇混合。它穿透力强，能使蛋白质变为不溶性，能保持细胞质的结构与生活状态相仿，并用于线粒体和高尔基复合器的固定，但需与甲醛、氯化汞等混合使用，是细胞学良好的固定剂。重铬酸钾固定的组织需经流水冲洗12—24小时。

（6）铬酸（H2CrO4）（chromicacid）：为强氧化剂，是一种弱酸，呈红色或浅褐色结晶，极易潮解，所以最好配成1％的水溶液保存。它是强烈的沉淀剂，不单独使用。硬化程度中等。固定肝糖的效果优良，它使肝糖不溶于水。在固定线粒体和高尔基复合器的固定液中都含有铬酸成分。

铬酸穿透力较慢，不使组织收缩。固定后的组织需经流水冲洗12小时以上，洗去铬酸，否则会发生沉淀，影响染色。

1．单一固定液的性质和用途

（1）乙醇（C2H5OH）（ethylalcohol）：又名酒精，可沉淀白蛋白、球蛋白、核蛋白，后者易溶于水，所以经酒精固定的标本对细胞核染色不良。酒精可溶解脂肪、类脂体，所以不能用酒精固定脂肪。酒精可沉淀肝糖，但仍可溶解于水，因此肝糖经酒精固定后不能在低于70％酒精中保存。单独固定使用酒精的浓度应为95—100％。无水酒精渗透力较差，并且能使组织收缩，在与醋酸、氯仿混合使用时，可增强它们的穿透力。酒精除固定作用外，还具有硬化和脱水的作用，固定后的组织可保存于70％酒精中，所以酒精在制片过程中用途很大。无水乙醇容易挥发，又容易吸收空气中的水分，所以瓶盖必须塞紧，为了吸去其中水分，最好在无水乙醇瓶内放入少量无水硫酸铜粉末。酒精是一种还原剂，不能与重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合使用。

（2）甲醛（HCHO）（formeldehyde）：是一种气体，溶于水成为甲醛水溶液或称福尔马林，一般使用浓度为10％福尔马林（formalin）液，其配法是取市售的甲醛液10ml与90ml蒸馏水混合即可，实际上其含量只有4％甲醛。这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。

甲醛不能沉淀白蛋白及核蛋白，但能与蛋白质化合。它是一种应用广泛，使用简单的固定液，具有穿透力强、固定均匀、组织收缩小、硬度适当，适用于一般器官组织的固定及保存。尤其对脂肪、神经组织固定效果较好。更适于病理组织的制片及大体积标本的保存，一般组织需固定24小时以上，固定后的组织可移入50％酒精中逐步脱水。

甲醛是一种强还原剂，不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合，因极易被氧化为甲酸。在配混合固定液时，如海利氏液等需临用前再加入，24小时后失效。

甲醛由于长期贮存，特别是低温气候，容易产生多聚甲醛，即溶液中的白色沉淀，在高温下又成为甲醛。不纯的甲醛易产生甲酸，使溶液变为酸性，影响核的染色。所以在备用的福尔马林中加入小量的醋酸钙、碳酸镁或大理石作为中和剂。可用下法配制10％中性甲醛溶液，pH为7.0左右：

40％甲醛100ml

蒸馏水900ml

磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）4.0g

磷酸氢二钠（Na2HPO4）6.5g

甲醛醋酸钙溶液：

40％甲醛10ml

醋酸钙2g

蒸馏水加至100ml

（3）醋酸（CH3COOH）（aceticacid）：纯醋酸在低温时结成冰状故又名冰醋酸，约在17℃时融化，能和水及乙醇混合。使用浓度为0.3—5％，它能很好地沉淀核蛋白，对染色质的固定效果很好。醋酸对染色体的保存能接近生活状态，因此在固定染色体的固定液中几乎都含醋酸。醋酸的穿透力很强。它能使组织膨胀，常与其他药剂配合使用，起抑制其他固定剂对组织收缩的作用。

醋酸破坏线粒体和高尔基体，所以在线粒体和高尔基体制片及固定液中都不用醋酸。

（4）苦味酸（C6H2（NO2）3OH）（picricacid）：是一种强酸，呈黄色结晶，溶于水、乙醇、苯和二甲苯。干燥时能自燃，爆炸，所以需湿性保存。一般配成饱和水溶液备用（100ml蒸馏水加1.2g苦味酸）。

苦味酸能沉淀蛋白质，对胞质固定较好。苦味酸的穿透力很慢，能使组织强烈收缩，一般都与醋酸等药剂配合使用。苦味酸固定的组织会出现黄色，可在低度酒精中加入少量碳酸锂饱和水溶液，洗去黄色。如遗留少许黄色在组织中，对染色无影响。

（5）重铬酸钾（K2CrO7）（potassium dichromate）：呈橙红色结晶，可溶于水，有毒，是强氧化剂，不应和乙醇混合。它穿透力强，能使蛋白质变为不溶性，能保持细胞质的结构与生活状态相仿，并用于线粒体和高尔基复合器的固定，但需与甲醛、氯化汞等混合使用，是细胞学良好的固定剂。重铬酸钾固定的组织需经流水冲洗12—24小时。

（6）铬酸（H2CrO4）（chromicacid）：为强氧化剂，是一种弱酸，呈红色或浅褐色结晶，极易潮解，所以最好配成1％的水溶液保存。它是强烈的沉淀剂，不单独使用。硬化程度中等。固定肝糖的效果优良，它使肝糖不溶于水。在固定线粒体和高尔基复合器的固定液中都含有铬酸成分。

铬酸穿透力较慢，不使组织收缩。固定后的组织需经流水冲洗12小时以上，洗去铬酸，否则会发生沉淀，影响染色。

（7）氯化汞（HgCl2）（mer cury bichloride）：又称升汞，呈白色针状结晶，能升华，是一种极毒的药品，对粘膜有腐蚀作用，使用时需特别当心。

氯化汞能沉淀一切蛋白质，使蛋白质变性不溶于水，对一般染色效果很好，对固定线粒体和高尔基体的效果也很好。

氯化汞穿透力较弱，收缩力较大，所以一般与醋酸、甲醛等混合使用。经氯化汞固定的组织会产生氯化亚汞沉淀，所以组织或切片需用0.5％碘酒处理3—5分钟，除去沉淀物，然后用2％硫代硫酸钠水溶液去碘处理1—2分钟。

（8）四氧化锇（OsO4）（osmiuln tatroxide）：又名锇酸（osmicacid）。是一种淡黄色结晶体，为强氧化剂，不可与酒精、甲醛混合，在配制使用过程中瓶皿需特别洁净，固定浓度为1—2％水溶液。需用棕色瓶贮存于4℃冰箱内。

锇酸是固定脂肪的最好固定剂。穿透速度很慢，能均匀固定蛋白质，能保持细胞生活时形态，不引起细胞收缩，对细胞质的保存较好，特别适用于线粒体、高尔基复合器的固定。固定后的透明处理，用苯为透明剂可得良好的切片效果。

锇酸价格极贵，毒性高，蒸气易损伤眼睛及粘膜，使用时应加小心。

锇酸固定的组织切片，不易被苏木精着色，需经过漂白处理。

Lacour漂白液的配制：

20％H2O2 10ml

80％酒精30ml

将切片置此液中漂白4—12小时，移入80％酒精、70％酒精、50％酒精中各2分钟，蒸馏水充分洗涤后，再进行染色。

以上简单的固定液各有优缺点，如无水酒精可固定肝糖，但不能固定脂肪，因脂肪易溶于酒精。而锇酸能固定脂肪，氯化汞对蛋白质固定较好，冰醋酸可以固定核蛋白等，它们只是对细胞的某些成分固定较好，而不能将所有成分都保存下来。如果互相配合使用，则能取长补短，得到较好的固定效果，只有了解药品的性质，才能清楚各固定液的性能。下面介绍几种常用的混合固定剂。

2．混合固定液的配制和性能

（1）包音氏（Bouin’s）固定液

苦味酸饱和水溶液75ml

甲醛（40％）25ml

冰醋酸5ml

本液在使用前配制。

包音氏液为常用的良好固定剂，适用于无脊椎动物，组织学、胚胎学均可应用。渗透力迅速，固定均匀，组织收缩少。小块组织固定2—12小时，一般组织固定12—24小时，固定后用50％酒精洗涤数次。

此液固定的组织适于苏木精、伊红等染色。用马瑞氏三色染色，能得艳丽的图像。

（2）任克氏（Zenker's）固定液

重铬酸钾2.5g

氯化汞6g

蒸馏水100ml

冰醋酸5ml

配制时将重铬酸钾、氯化汞溶于加温的蒸馏水，冰醋酸临用前加入。此固定液适用于细胞学、组织学的研究工作。固定时间一般需12—24小时。固定后要用流水冲洗12小时，用碘去汞。此液固定的组织适于一般染色，细胞核、细胞质染色较为清晰。

（3）海利氏（Helly's）液

重铬酸钾2.5g

氯化汞6g

蒸馏水100ml

40％甲醛液5ml

此固定液是将任克氏配方中的冰醋酸换成甲醛液，甲醛也在用前加入，因在加入甲醛24小时后即生成沉淀而失效。固定时间12—24小时。海利氏液为骨髓、脾、肝等造血器官的较好固定剂。此液亦可保存线粒体，染色前需用碘去汞。

（4）苏萨氏（Susa's）[海登哈音氏（Heidenhain's）]

液：

氯化汞4.5g

氯化钠0.5g

40％甲醛液20ml

三氯醋酸2g

冰醋酸4ml

蒸馏水80ml

将4.5g氯化汞和0.5g氯化钠溶于80ml蒸馏水中保存。临用前取此液20ml，加入三氯醋酸0.5g，40％甲醛5ml，冰醋酸1ml，混合使用。

此液含有三氯醋酸和氯化钠，对较硬的组织有软化作用，如皮肤、蛔虫卵、昆虫幼虫等角质层较厚的组织，食道、胃均能适用。它具有渗透快、收缩小的优点。小块组织固定3—5小时；大块组织，如皮肤固定12—24小时。固定后可直接入95％酒精洗涤，勿入水或低度酒精，否则易使胶原纤维膨胀。切片在染色前，用碘去汞。

（5）卡诺氏（Carnoy's）液

纯酒精60ml

氯仿30ml

冰醋酸10ml

此液穿透力强，对核固定优良，是细胞学制片常用的固定液。酒精能固定胞浆及沉淀肝糖，冰醋酸能固定染色质并防止酒精过度硬化和收缩，氯仿可增加渗透力。小白鼠的睾丸和马蛔虫的子宫固定需30—50分钟，稍大一些的淋巴结、胸腺等组织，可固定1—2小时。时间太长易使组织过度硬化，不利于切片。固定后直接入95％酒精洗涤，然后脱水、透明、包埋。

（6）酒精、甲醛（简称A．F）液

95％酒精90ml

40％甲醛10ml

如需要可加入0.5g的醋酸钙使其呈中性。此液有固定兼脱水的作用，用于病理快速诊断的制片，也适于肥大细胞的固定。2—3mm厚的病理组织在50℃固定40分钟，一般室温固定12—20小时，固定后可直接入95％酒精脱水。

总之，固定液的种类很多，用时可查阅制片方面的书籍。首先要根据实验目的，选用固定液。但应用时必须首先了解各种混合固定液中的组成成分能否预先混合，固定后是否需要洗涤，然后再开始配制固定液。