甘油菌种复苏与保藏具体步骤

菌种保藏（culture preservation，culture collection）是保持微生物菌株活力和遗传性状的关键技术。在分子生物学研究中，经过基因编辑或改造的菌种通常非常珍贵且微量，因此需要进行妥善的保藏。以下是具体的操作步骤：

菌种保藏

将待保存的菌液与配好的甘油混合液按1:1比例混合，最终达到20%甘油浓度。配置40%（v/v）甘油灭菌水混合液。

取2ml离心管或保菌管，加入500微升40%甘油-水混合液。

用移液枪吸取500微升菌液，将枪头深入液面以下缓缓加入。

将离心管或保菌管放入-80℃冰箱保存。

在保菌管上标明日期、菌种、抗性等详细信息，以便日后识别。

菌液复苏

复苏保存的菌液可以进行后续操作。主要步骤如下：

取含有抗性的LB培养基，每个培养管装入约八毫升。所有操作均在无菌操作台进行，以防污染。

向每管加入100微升菌液，37℃、180rpm摇12小时。

氨苄抗性配置：1g氨苄青霉素钠溶解于10ml灭菌水中，过滤后-20℃保存。

LB培养基配置：10g氯化钠、10g胰蛋白胨、5g酵母提取物溶于一升体系中，分装到250ml锥形瓶，每瓶100ml。Amp抗性：100ml培养基加入100微升氨苄抗性。

通过这些简单的步骤，你可以有效地保藏和复苏珍贵的菌种，为后续的分子生物学研究提供坚实的基础。