辛基-琼脂糖凝胶4FF的使用方法及注意事项

    ——上海远慕生物详述！

    产品简介：
    辛基-琼脂糖凝胶4FF是将辛基键合在琼脂糖凝胶上形成的一种可利用疏水作用来实现目标产品纯化分离的中等疏水类介质。适合各种蛋白的分离和纯化。具有流速快，使用方便，应用广泛的特点。

    产品参数：
    产品名称：辛基-琼脂糖凝胶4FF(Octyl-Sepharose4FF)
    基质：6%交联琼脂糖凝胶
    配基：正丁烷基n-Octyl
    配基密度：5μmol/mL
    颗粒大小：45-165μm
    最大流速：600cm/h
    工作pH：3-13
    操作温度：室温
    使用说明：辛基-琼脂糖凝胶4FF是一种中等疏水层析介质，适合各种蛋白的分离和纯化。

    使用方法：
    1.装柱：
    （1）将所有的试剂和填料达到室温.配制初始缓冲液(平衡液)和缓冲液。
    （2）根据柱子大小取所需凝胶的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3:1比例）配成匀浆。
    （3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液体（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
    （4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意不要使用气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
    （5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

    2.平衡：
    让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如：0.02-0.05mol/L的PBS加1-2.5mol/L(NH4)2SO4等。
    3.上样：
    （1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心、过滤后上柱；
    （2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡洗液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。
    （3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。温度越大、盐浓度越高或样品组分疏水性越强，介质对组分吸附越牢。
    4.洗脱：
    疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或者有机溶剂可加强洗脱。最常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液，如：0.02-0.05mol/L的PBS。
    5.再生：
    一般用低盐浓度的缓冲液洗，洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活的蛋白或者脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

    6.在位清洗：
    （1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2MNaCl去除。
    （2）对沉淀蛋白、以疏水作用结合的蛋白或者脂类物质，可用1MNaOH去除。
    （3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，可用4-10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。
    （4）清洗完毕后，用至少3倍柱体积缓冲液平衡柱子。
    7.去热源：
    用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5-6小时或者用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下步骤去除：
    （1）2倍柱体积的70%的乙醇；
    （2）2倍柱体积50MmTris-HcLPh7.5
    （3）1倍柱体积4M尿素
    （4）3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1MNaCl;
    以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
    8.消毒：
    用0.5-1.0MNaOH室温下洗8-10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

    注意事项：
    （1）密封贮存于4°C-28°C（保存溶液为20%乙醇+0.1M醋酸钠），通风、干燥的地方，不能冷冻。用过的柱子贮存于4°C（20%乙醇）。
    （2）在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。