1、采集样品前的准备事项
A、器具
a、器具的准备
保温箱或保温瓶,酒精棉,碘酒棉,棉签、注射器及针头(7×38,9×38,12×38,20×38等)。
b、辅助器材的准备
保温箱、离心管、试管架、记号笔、自封袋,胶布、封口膜、封条、冰(暖)袋等。
B、防护安全用品
在给新生牛血清采集时,我们会要求采集者都应该注意防护安全,需要准备好口罩、乳胶手套、防护服、防护帽、胶靴等。
2、采集样品进行时
A、操作步骤
a、由于新生牛属比较小型体,所以我们只需将其稳定,使其头部稍前伸并稍偏向对侧。
b、对颈静脉局部进行剪毛、消毒,在这过程中,我们最好要安抚新生牛的情绪,以免新生牛出现不适而乱动。
c、看清颈静脉后,采血者用左手拇指(或食指与中指)在采血部位稍下方(近心端)压迫静脉血管,使之充盈、怒张。
d、右手持采血针头,沿颈静脉沟与皮肤呈45°角,迅速刺入皮肤及血管内,如见回血,即证明已刺入;使针头后端靠血管内,如见回血,即证明已刺入;使针头后端靠近皮肤,以减小其间的角度,近似平行地将针头再伸入血管内1~2厘米。
e、放开压迫脉管的左手,收集血液。采完后,以干棉球压迫局部并拔出针头,再以5%碘酊进行局部消毒。
B、注意事项
a、采血完毕,做好止血工作,即用干棉球压迫采血部位止血,防止血流过多。
b、牛的皮肤较厚,颈静脉采血刺入时应用力并瞬时刺入,见有血液流出后,将针头送入采血管中,即可流出血液。
3、采集样品成功后的保存及编号填写
a、待样品采集完毕后,我们应该要对其进行血样编号填写及保存,血样采集后应立即进行编号,编号注意与被采畜禽一一对应。
b、编号规则:注明采集地区、养殖场名称、动物种类(如采样较多,可以一个养殖场一个自封袋,在自封袋上注明信息,在离心管上注明编号)。
c、保存方法:一般选用塑料泡沫箱存放血液或血清。采血后针头向上扎进箱壁或放入离心管中存放;箱内放入冰块或暖水袋,保证箱内20-25℃的室温水平保存2小时以上即可析出血清;如果能在24小时内及时送样可2-8℃冷藏保存,若不能及时送样化验需冷冻保存。
1、在说到新生牛血清的应用范围前,我们需要先了解一下培养基与新生牛之间的关系,细胞培养基是培养环境中最重要的成分,由培养基和新生牛血清混合组成的完全培养基能够提供细胞生长所必需的营养素、生长因子和激素,并能调节培养体系的 pH 值和渗透压。
2、目前主要有两种基本的细胞培养体系,一种是使细胞在人工基质上单层生长 ,即贴壁培养、微载体、片状载体等培养方式),另一种是使细胞在培养基中自由漂浮生长 即悬浮培养,其中包括全悬浮培养和需要借助载体的培养。
3、除造血细胞系和其他一些细胞外,大多数脊椎动物细胞均具有贴壁依赖性,必须在合适的基质上培养,且该基质必须经过特殊处理,以便细胞粘附和伸展 (即组织培养处理)。但是,许多细胞系也可采用悬浮培养。
4、由于新生牛血清在两种培养体系中发挥的作用有所区别,如贴壁培养血清主要提供贴壁因子和营养物质,而悬浮培养则主要提供促细胞生长的因子;其主要的应用范围一般来说,主要有以下这些!
5、新生牛血清在动物细胞悬浮培养的应用中依据细胞是否具有贴壁依赖性,分为动物细胞全悬浮细胞培养和动物细胞微载体悬浮培养;全悬浮细胞(如BHK21悬浮细胞株)可以在生物反应器中直接进行生产增殖,具有细胞自由生长、培养环境均一、取样简单、培养操作简单可控、放大方便、污染率和成本低的特点。
6、贴壁细胞(ST、Vero细胞等)在生物反应器中悬浮培养时需要借助介质表面,通常是微载体,其细胞所能达到的浓度和生产产品的产量依赖于微载体提供的生长表面积;微载体为动物细胞生长提供了便利的表面,具有极大的培养表面积/体积比,它能够实现细胞高密度培养,是目前贴壁动物细胞大规模培养使用的主要介质。
7、在悬浮培养中,生产抗体药物的CHO细胞、生产流感(禽流感)疫苗的MDCK细胞等已经采用无血清培养;但在BHK21细胞全悬浮培养的口蹄疫疫苗生产中,牛血清仍然被广泛使用。
8、在南美和印度,口蹄疫疫苗生产通常添加10%左右成牛血清,而国内企业采用低血清培养基弥补了基础细胞培养基的不足;但是,牛血清中的一些促细胞生长的成分还是无法被替代,通常会在培养基中添加1%-3%的牛血清,同时它还起着调节培养液酸碱度的作用。
9、为使培养体系保持良好的混合状态和分散性,从而提高细胞生长量,需对培养体系进行搅拌,这时培养基中的牛血清即可以降低细胞的机械损伤;总而言之,牛血清因有着细胞生长必须的营养成份,所以具有极为重要的功能。
10、主要用于原代细胞培养、传代细胞培养及病毒疫苗的研制和生产;对培养中的细胞起到某些保护作用。
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