如何选择缓冲液 HEPES缓冲液的配制方法

如何选择缓冲液 HEPES缓冲液的配制方法

如何选择缓冲液， 缓冲液有什么优点及缺点

一般来说，在选择缓冲液时，我们需要遵循以下几个要求，特别是需要确定该缓冲液所需的PH值，具体如何选择请参考下面说明：

选择缓冲体系，其解离常数pKa值应该在设定的pH上下一个pH值单位内，因为缓冲液的pKa变化超过一个pH单位时，其缓冲能力就会明显下降；

缓冲体系不应影响蛋白质的活性或者DNA的稳定性，并避免其他离子的干扰；

最后，还要考虑温度的影响：温度不仅对缓冲液有影响，对细胞也有影响，大多数动物细胞在37℃的生理状况下pH为7.0~7.5，而在温度下降到0℃时可达到8.0。

那么缓冲液有什么优点及缺点有哪些呢?由于缓冲液的品种特别多，所以我们拿出几个系列的产品作详细讲述！
 

磷酸盐缓冲液的优点及缺点：

磷酸盐缓冲液是使用最为广泛的一种缓冲剂，由于它有二级解离，所以缓冲的pH值范围很广，可配置各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液。

A、优点

易配成各种浓度

适用pH范围宽

pH受温度影响小

稀释后pH变化小

B、缺点

易与常见的钙离子、镁离子及重金属离子缔合成沉淀

Tris缓冲液的优点及缺点

Tris缓冲液是在生物化学研究中使用较广泛的一种缓冲剂，其本身为弱碱，常用有效pH在“中性”范围。

A、优点

碱性较强，可以只用这一种缓冲液配置由酸到碱的但范围pH缓冲液;

对生物化学过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。

B、缺点

pH受浓度影响较大，稀释10倍，pH变化大于0.1

温度效应大，如4℃时pH=8.4，37℃时pH=7.4

易吸收空气中的二氧化碳

HEPES缓冲液的优点及缺点

HEPES是一种非离子两性缓冲液，其在pH7.2~7.4范围内具有较好的缓冲能力，常用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。

A、优点

在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的pH值，并对细胞无毒性作用。

B、缺点

在高浓度时对一些细胞可能有毒，与其他缓冲剂相比价格略贵。

更多缓冲液的优点及缺点详情请来电联系上海远慕生化试剂厂家，本司所供应的缓冲液产品满足于用户需求，下面我们一起来了解下HEPES缓冲液的配制方法。

HEPES缓冲液的配制方法详细说明

HEPES缓冲液的配制方法

一、500ml 1 MHEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2)，然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。

二、加少量盐的HEPESBuffer配方(500ml)

HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，最后定容。

三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制

将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水，用0.5M NaOH调节至所需pH值，再用蒸馏水定容至100ml即可。

HEPES使用方法有两种：

A、HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES，待溶后用lNNaOH 调pH至7.2，滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。

B、亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L)，使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，最终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES贮存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中，用lN NaOH调pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，过滤除菌，分装小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。

需要注意的是，HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L，对细胞无毒性作用。一般情况下，浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。现在市售HEPES为约10g包装的小瓶，大家根据实际情况正确灵活配制就可以。

看完如何选择缓冲液，HEPES缓冲液的配制方法这篇文章后，相信你对缓冲液也有进一步的了解，由于缓冲液多见用于科研实验上，所以我们在实验过程中一定要保证产品的质量，了解相关的配制方法及使用方法等都是每一个实验人员需要知道的，如果你对缓冲液还有什么好的见解，欢迎和我们一起来讨论。
 

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