远慕生物详谈:石蜡切片及染色过程

一、 石蜡切片

1.  取材: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm为宜. 取材时间越快越好.

2.  固定: 组织取下后应立即放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定.

注意:

(1). 固定液量应为组织块体积的40倍.

(2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等有关. 一般为3—24h.

(3)固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长.

(4)固定容器应大些.

3.  漂洗: 流水冲洗2—10h.

4.  脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精.

70%(数分钟)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→100%(60-120’)→100%(60-120’).

5.  透明: 组织块脱水后必须经过一种既能与酒精混合又能溶解石蜡的溶剂, 而使石蜡进入组织块. 常用二甲苯, 一般浸泡30m即可.

6.  浸蜡: 组织经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡. 一般需经2—3次浸渍才能完成, 总时间为3—4h. 用于浸蜡的石蜡熔点为52—56℃.

7.  包埋: 先将熔化的石蜡倒入包埋框再用加热的镊子将组织块放入. 包埋面必须平整. 包埋后石蜡稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固.

8.  切片: 修块→切片→展片→捞片→烤片.

二、 HE染色

1.  染色前切片处理

(1)  脱福尔马林色素.

(2)  脱汞盐结晶.

(3)  脱黑色素.

2. 染色步骤

二 甲苯脱蜡(10’)→ 无水乙醇洗去二甲苯(1’×2次)→95%酒精(1’)→90%酒精(1’)→85%酒精(1’)→自来水洗(2’)→苏木精染色(1—5’)→自来水洗 (1’)→1%盐酸酒精分化20s→自来水洗(1’)→稀氨水(1%)反蓝30s→自来水或蒸馏水洗(1’)→伊红染色(20s—5min)→自来水洗 (30s)→85%酒精脱水(20s)→90%酒精脱水(30s)→95%酒精(1’)→95%酒精(1’)→100%酒精(2’)→100%酒精 (2’)→二甲苯(2’)→中性树胶封片.

3.   染色结果: 细胞核呈兰色, 胞浆呈红色.

三、 盐酸酒精的配制

浓盐酸0.5—1ml + 75%酒精99ml.

此液用一段时间后需延长或更换液体, 新液体分化时间要短.