全血细胞培养染色体技术常用试剂配制

一、国内实验室应用试剂配制
（一）培养液
（1）RPMI1640培养液：称取RPMI培养基9.8g，碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml，加双蒸水至1000ml，调节 pH7.2～7.4无菌过滤冻存备用。
（2）小牛血清商品：成都生物制品厂。
（3）植物凝集素（PHA）：自制或成品（重庆药检所）。
（4）pH调整液：5% NaHCO3溶液高压灭菌（8磅15min），0.1N稀盐酸液100ml。
（5）秋水仙素：10mg/ml无菌过滤高压灭菌（8磅10min）。
（6）磷酸缓冲液：pH7.4。
磷酸氢二钠28.8g(H2O)、磷酸二氢钾2.67g(无水)，溶于1000ml双蒸水中，加肝素，终浓度为100u/ml。

（7）Giemsa染色液：
Giemsa粉剂 1g
甘油 66ml
在研钵中，加入少量甘油油仔细研磨然后放甘油全部加磨，60℃温箱中保温2h，冷却后加入甲醇66ml。装入有色瓶中混合待用。染色时用pH7.4磷酸缓冲液稀释10倍，随配随用。
 
（二）固定液
（1）甲酸：冰乙酸3：1混合即用。
（2）PBS缓冲液配制：
NaCl 16g Na2HPO4(12H2O) 5.65g
KCl 0.4g KH2PO4 0.4g
加双蒸水至1000ml pH7.0。
取5%胰酶（生理盐水配制）1ml加入50ml PBS液中（最终浓度为0.025%），4℃冰箱待用。

二、细胞培养（Bhatl B和McGee JOD,1990）
1．完全培养基
RPMI 76.0ml
胎牛血清 20.0ml
植物凝集素 2.0ml
抗生素/抗菌素溶液（100）