如何精确测定AAV病毒载体空壳率？

重组腺相关病毒（AAV）作为病毒载体，具有安全性好、特异性强、递送效率高等特点，为新的、挽救生命的基因治疗方法带来巨大的希望。但是，虽然电镜等技术可以表征AAV的均一性和聚集状态，但它们没有足够的分辨率来准确定量病毒颗粒的均一性和有效载量。而解决这一问题的方案是：使用分析型超速离心技术（AUC）表征AAV病毒颗粒特性。

正如基因治疗研究人员所知道的那样，在早期产品开发中有非常多的风险，快速检测产品质量是至关重要的。但到目前为止，使用之前的技术来检测临床级的重组AAV载体仍然是不现实的。

· qPCR/ELISA、光密度法均为间接检测方法，结果只能用于样品间的对比，而无法准确定量

· 电子显微镜可以在视野中看到空壳颗粒与实心颗粒，但无法确定包含所DNA是否完整，同时也无法定量

· 离子交换色谱法面临分辨率不够、不同血清型病毒颗粒不适用于同一种分析方法等问题
因此，主要的障碍是缺乏高分辨率、可用于定量的技术来监测病毒颗粒产物特性，比如：

· 均一性

· 纯度

· 批次一致性

· 病毒有效载量

使用分析型超速离心技术（AUC）表征AAV病毒颗粒的特性，可以帮助精准测定AAV病毒载体空壳率！

分析型超速离心技术（Analytical Ultracentrifugation，AUC）是表征生物大分子特性、研究生物分子理化性质的主要技术手段之一，用于分析样品异质性、聚集体的形成以及分子间相互作用等。

依据溶液中空壳、实心、中间产物等不同状态病毒载体的沉降系数的不同，AUC分析得到的c(s)分布可以表征AAV病毒载体特性。并且在检测过程中使样品不接触任何基质、不使用任何标准品与标记物，直接检测溶液中AAV病毒颗粒特性。AUC可以帮助研究人员：

ü 定量检测，精确测定病毒载体有效载量或空壳率。

ü 可以表征生产过程中的产物，帮助确定去除空颗粒的方法。

ü 可以监测AAV载体结构的异质性、聚集状态。

ü 可以区分、量化样品中的多个组分，包括空病毒颗粒、包含全基因组病毒颗粒、包含部分基因组病毒载体、载体碎片、基因组碎片等。

ü 根据不同血清型的AAV载体，对转入基因的大小和单/双链状态进行定量。