困难样本RNA提取的技能你get到了吗？

DNA、RNA和蛋白质是三种重要的生物大分子，是生命现象的分子基础。DNA的遗传信息决定生命的主要性状，而mRNA在信息传递中起着重要的作用。其他两大类RNA，即rRNA和tRNA同样在蛋白质的生物合成中发挥着不可替代的功能。因此RNA在DNA和蛋白质中间起着中介的作用，其重要性不言而喻。

在研究RNA的分子实验中，获得高质量的RNA至关重要，但是有些样本因为细胞结构特殊、代谢产物极其丰富、本身RNA丰度低等因素，影响到RNA提取质量。另外，由于RNA酶的广泛存在并难以消减的顽强特性，使得RNA的抽提纯化更为困难。

那么今天我们针对RNA提取相关知识展开简短的介绍~

一、 RNA提取原则

(1) 保证RNA分子的完整性

(2) 排除DNA分子的污染

(3) 排除有机溶剂、金属离子、蛋白质、多糖、多酚、脂类的污染

(4) 获得足量的核酸

(5)方法操作简便，稳定性强



 不同组织中RNA丰度示意图

二、 RNA种类

有mRNA、rRNA、tRNA、LncRNA、circRNA、miRNA、piRNA、siRNA等

三、 RNA提取注意事项

1、操作环境干净无灰尘，严格戴好口罩、手套等。

2、实验所涉及的离心管、枪头、移液器、电泳槽、实验台面等要用RNase抑制剂彻底处理。

3、实验所涉及的试剂、溶液，尤其是水必须确保RNase-Free。

4、选择合适的匀浆方法。

5、选择合适的裂解液。

6、控制好样品的起始量。

7、控制好裂解液与样品量的比例。

8、RNA抽提成功的唯一经济标准是后续实验的一次成功，而不是得率。即综合RNA的得率和纯度。

四、 RNA提取原理及常用方法问题

1、 RNA提取原理

RNA提取步骤，大致可分为裂解和纯化。首先对样品裂解，采用机械力、化学试剂等方法将RNA释放出来，随后去除蛋白质、糖、酚、金属离子等杂质，再用无水乙醇、异丙醇沉淀或载体吸附RNA，之后洗涤溶解即可得到核酸。

2、RNA提取常用方法

    异硫氰酸胍/苯酚法（如Trizol法）

    试剂盒过柱法

    磁珠法

    改良方法

3、RNA提取过程中常见问题