IHC免疫组化常见问题分析

分析一下免疫组化实验中一些常见的问题和解决措施：

常见问题一：所有切片呈阴性
原因分析：
a.缓冲液内含叠氮化钠，抑制酶的活性；
b.染色未完全按照操作步骤进行；
c.漏加一种抗体或抗体失活；
d.复染或脱水剂使用不当；
e.底物中加入的过氧化氢少或失活。
解决措施：设立“阳性对照”。如果阳性对照有了表达，说明染色的全过程和所有试剂都没有问题。如果此时测试片仍为阴性，便是真实的阴性，说明组织或细胞没有相应的抗原表达。

常见问题二：所有切片呈阳性
原因分析：
a缓冲液配置中未加氯化钠和PH值不准确，洗涤不彻底；
B使用已变色的呈色第五溶液，或呈色反应时间过长；
C过氧化氢浓度过高，呈色反应过快且粘附剂太厚；
D切片在染色过程中抗体过浓，或干片了；
E抗体孵育时间过长。
解决措施：缩短抗体孵育时间和呈色反应时长，染色过程中防止出现干片情况。

常见问题三：切片背景过深
原因分析：
a.漂洗不够；
b.切片或涂片过厚；
c.蛋白质封闭不够或所用血清溶血
d.使用全血清抗体稀释不够；
e.底物成色反应过久；
解决措施：对一些新的或少用的抗体显色时进行监控，避免显色时间过长。

常见问题四：切片边缘着色
原因分析：
a组织边缘与玻片粘贴不牢，边缘组织松脱漂浮在液体中，导致洗涤不彻底；
b切片上滴加的试剂未充分覆盖组织，边缘的试剂容易首先变干，浓度较中心组织高而致染色深。
解决措施：组织的前期处理应规范，试剂要充分覆盖组织，尽量避免选用坏死较多的组织。