斐林试剂(GB/T 5009.7-2016)说明书

斐林试剂(GB/T 5009.7-2016)

供应商：远慕生物

货号：R19048 

规格：2×100ml

保存：RT密封，避光，有效期6个月。

试剂(A): Fehling's solution A100ml RT

试剂(B): Fehling's solution B 100ml RT

产品内容：

产品简介：

斐林试剂(Fehling's Reagent)又称菲林试剂或裴林试剂，是德国化学家Hermann von Fehling 1849年所发明，与班氏试剂(Benedict's Reagent)相似，均是用来检测还原糖的存在，其原理是与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。

斐林试剂(GB/T 5009.7-2016)是根据国家标准(食品中还原糖的测定)推荐的直接滴定的方法，主要由酒石酸钠钾、硫酸铜、亚甲蓝、亚铁氰化钾等组成，本产品的成分、原理和用途与斐林试剂(Fehling's Reagent)(货号TC0002)稍有区别。斐林试剂(GB/T 5009.7-2016)主要用于含淀粉食品、酒精饮料、碳酸饮料、肉制品、蜜饯等食品中还原糖的定量检测；总糖的含量也可以测定，但需要提前水解后才能检测，也可用于还原糖的定性试验，该方法的检测原理是试样经去蛋白处理后以亚甲蓝为指示剂，在加热条件下滴定标定过的斐林试剂(A液与B液等量混合生成的可溶性蓝色的酒石酸钾钠铜络合物，也称作碱性酒石酸铜溶液），样品中的还原糖将酒石酸钾钠铜中的二价铜还原成红色的氧化亚铜沉淀，氧化亚铜沉淀又与亚铁氰化钾反应生成可溶性的无色络合物，当二价铜全部被还原，稍过量的还原糖把亚甲蓝还原，溶液就由蓝色变为无色，即为滴定终点，根据样品液的消耗体积计算还原糖含量；本产品未经标定，需客户自行标定。该试剂仅适用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料:

试管、锥形瓶、容量瓶、玻璃珠

2、水浴锅、酒精灯等加热装置

3、葡萄糖、果糖、转化糖等还原糖标准(1mg/ml)

4、50%盐酸水溶液、氢氧化钠溶液

Z酸锌溶液、亚铁氰化钾溶液

分析天平、酸式滴定管

操作步骤（仅供参考）：

1、Fehling's Reagent的标定:

25ml的酸式滴定管中加入还原糖标准溶液(1mg/m)约15ml ,向150ml锥形瓶中依次加入Fehling's Reagent A液和B液各5ml，再向其中加入10ml水和2~4粒玻璃珠，加热锥形瓶,控制时间在2min内沸腾,保持沸腾以每2秒1滴的速度滴加还原糖标准溶液，直到溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗标准溶液的总体积，平行操作3次,取平均值，计算每10ml Fehling's Reagent(A、B液各5ml)相当于还原糖的质量(mg)。

2、试样准备:

1)含淀粉食品:称取粉碎或混匀后的试样10~ 20g(精确到0.001g )置于250ml容量瓶中，

加水200ml,45°C水浴中加热1h，并时时振摇,冷却后加水至刻度,混匀，静置,沉淀，

吸取200.00ml.上清液置于另一250ml 容量瓶中,缓慢加入乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液

各5ml ,加水至刻度,混匀静置30min ,用干燥滤纸过去，弃去初滤液,后续滤液备用。

2)酒精饮料:称取混匀后的试样100g(精确到0.01g ),置于蒸发皿上，用氢氧化钠溶液中

和至中性，在水浴上蒸发至原体积的1/4后移入250ml容量瓶中,缓慢加入乙酸锌溶液和

亚铁氰化钾溶液各5ml ,加水至刻度，混匀静置30min，用干燥滤纸过去，弃去初滤液，

后续滤液备用。

3)碳酸饮料:称取混匀后的试样100g(精确到0.01g)置于蒸发皿上,在水浴上微微搅拌除

去二氧化碳后移入250ml容量瓶中，用水洗涤蒸发皿，并入容量瓶,加水至刻度,混匀后

备用。

4)其他食品:称取粉碎后的固体试样2.5~ 5g(精确到0.001g )咸混匀后的液体试样5~25g

(精确到0.001g )置于250ml容量瓶中,加水50ml，缓慢加入乙酸锌溶液和亚铁氰化钾

溶液各5ml ,加水至刻度,混匀静置30min ,用干燥滤纸过去，弃去初滤液,后续滤液备

用。

3、试样溶液预测:

25ml的酸式滴定管中加入试样溶液约15m,向150ml锥形瓶中依次加入Fehling's

Reagent A液和B液各5ml，再向其中加入10ml水和2~4粒玻璃珠,加热锥形瓶,控制

时间在2min内沸腾, 保持沸腾以先快后慢的速度滴加试样溶液, 待溶液颜色变浅时以每2

秒1滴的速度滴加,直到溶液蓝色刚好褪去为终点,记录消耗试样溶液的总体积。(注:试

样溶液中还原糖浓度过高时, 应适当稀释后再行测定;尽量使每次滴定消耗样液的体积和标定斐林试剂所消耗的还原糖标准溶液的体积相近约10ml ;当浓度过低时可直接加入10ml试样溶液，不再加10ml水，再用还原糖标准溶液滴定至终点，记录消耗的体积与标定时消耗的还原糖体积之差相当于10ml样液中所含还原糖的质量。)

4、试样溶液测定:

25ml的酸式滴定管中加入试样溶液约20ml向150ml锥形瓶依次加入Fehling's Reagent

A液和B液各5ml再向其中加入10ml水和2~4粒玻璃珠加热锥形瓶控制时间在2min

内沸腾,保持沸腾以每2秒1滴的速度滴加试样溶液，直到溶液蓝色刚好褪去为终点，记

录消耗试样溶液的总体积,平行操作3次,取平均值。

结果计算:

试样中还原糖的含量(以某种还原糖计)按下边公式计算:

当浓度过低时,试样中还原糖的含量(以某种还原糖计)按下边公式计算:

备注:   X=试样中还原糖的含量(以某种还原糖计)( g/100g );

m1=斐林试剂( A、B液各半)相当于某种还原糖的质量(mg) ;

m2=标定时体积与加入样品后消耗的还原糖标准溶液体积之差相当于某种

还原糖的质量(mg) ;

m=试样质量(g) ;

F=样品系数，含淀粉食品为0.8，其他为1 ;

V=测定时平均消耗试样溶液体积( mI);

10=样液体积( ml);

250=定容体积( ml );

1000=.单位换算系数。

还原糖含量≥10g/100g时，计算结果保留三位有效数字;还原糖含量< 10g/100g时，

计算结果保留两位有效数字。

附录:还原糖的定性试验

1、配制斐林试剂工作液:临用前,取适量试剂(A)、试剂(B)等 量混合即成,即配即用。

2、向洁净试管中加入1~ 2ml待测样品。

3、向该试管中加入1ml斐林试剂工作液，充分摇匀。

4、将上述混合液置于沸水浴中,并持续1 ~ 3min.

5、观察试管内混合液颜色是否发生变化,其颜色变化顺序应为浅蓝色-棕色-砖红色(沉淀)。