四硫磺酸盐煌绿增菌液基础（TTB） 简介说明

四硫磺酸盐煌绿增菌液基础(TTB)用于沙门氏菌选择性增菌培养，需加入煌绿和碘液。

原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供碳源、氮源和维生素满足细菌生长的需求;氯化钠可维持均衡的渗透压;碳酸钙能中和细菌产酸及吸收有毒的代谢产物;硫代硫酸钠和四硫磺酸钠结合可抑制肠道共生菌(四硫磺酸钠是在培养基加入碘和碘化钾时形成)，而具有四硫磺酸钠还原酶的细菌能在此培养基中繁殖;胆盐和煌绿可抑制大肠群菌和其它革兰氏阳性细菌。

使用方法：

1、称取本品93.6g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于三角瓶中，每瓶100mL。

2、将三角瓶放入灭菌锅中，121℃高压灭菌20min，冷至30℃，每100mL基础培养基中加入四硫磺酸钠煌绿增菌液配套试剂(SR0040)2支配成四硫磺酸钠煌绿增菌液或再添加2支新生霉素(SR0030)配成MKTTn肉汤，混合均匀。

3、在无菌环境中，移取增菌液1mL转种于10ml TTB/MKTTn中或移取前增菌液25ml转种于225ml TTB中。

4、将已接种的试管放入恒温培养箱中，42℃培养18—24h。

5、观察结果。

应用：用于牦牛沙门氏菌分离鉴定方法及流行病学研究

牦牛是青藏高原特有的物种，是当地牧民重要的生产和生活资料。牦牛沙门氏菌病在牧区长期流行，引起牦牛严重的下痢和死亡。目前国内外其他动物源沙门氏菌研究报道较多，但是对牦牛沙门氏菌报道较少。由于粪便是沙门氏菌主要来源，为了从源头控制沙门氏菌的传播，对体表健康牦牛粪便沙门氏菌监测是具有重要公共卫生学意义。

对体表健康牦牛粪便沙门氏菌的分离鉴定方法及牦牛源沙门氏菌的流行病学进行了研究。

实验结果：根据ISO6579:2002(Annex D)标准、GB4789.42010标准、NMKL71标准和DIN EN12824:1998标准，在2010年采集26份牦牛粪便，选择了三种选择性增菌液TTB，SC，MSRV和三种选择性培养基XLD，SS，CAS，比较了9种分离方法对牦牛粪便沙门氏菌分离的影响。

结果发现九种分离方法结果有差异，以TTB增菌液组合SS培养基分离率最高，为8/26。实验总共检测到13头牦牛携带沙门氏菌，通过比较发现TTB增菌液和MSRV增菌液组合CAS培养基和SS培养基，分离率最高为12/26。

根据国内外文献报道，比较了分别以invA、invE、stn、16S、bidui基因为检测靶点的5种PCR方法。48株牦牛沙门氏菌的鉴定情况，证明了这5种PCR方法检出率均为100%，因此这5种方法可用于牦牛源沙门氏菌快速检测。参照Liu B等人建立的沙门氏菌血清群PCR快速检测方法，48株牦牛沙门氏菌中共鉴定出9株血清B群、1株C1群和37株D群，证明该方法适用于牦牛沙门氏菌血清群PCR快速检测。