平板计数琼脂（PCA）使用方法

产品名称：平板计数琼脂(PCA)
英文名称：Plate Count Agar
产品规格:250g
供应商：上海远慕
产品用途：PCA培养基用于检测食品、奶制品、饮用水、化妆品中微生物含量。既用于标准方法，也用于自动化螺旋板计数法。
储存条件：4 ℃保存，3 年有效。

产品描述：
平板计数琼脂（Plate Count Agar）简称PCA，是非选择性固体培养基，用于食品、化妆品和饮 用水中微生物计数。
本培养基配方采用标准法配方。

平板计数琼脂(PCA)原理：
胰蛋白胨提供有机氮源和游离氨基酸，酵母提取物提供生长因子，葡萄糖作为能量物质。平板计数琼脂培 养基中的营养成分能够支持牛奶及饮用水中绝大多数微生物的生长。

组成成分(g/L)：
胰蛋白胨     5.0
酵母提取物     2.5
葡萄糖     1.0
琼脂     15.0
pH 7.0± 0.2     

配制方法：
1. 称取以上组分，或者直接称取本公司的平板计数琼脂培养基23.5g 本品，用1000ml去离子水重悬，加热搅拌使其全部溶解。
2. 平板计数琼脂培养基的灭菌温度是：121°C高温灭菌15min。
3. 待冷却至55°C时倒20ml培养基到90mm无菌培养皿中。
4. 对于酵母和霉菌含量高的样品，则用100mm培养皿，每个培养皿倒入20-25ml培养基。 待琼脂表面干燥后使用。

本产品仅供科研使用，请勿用于医药，不能用于临床治疗诊断使用！

平板计数琼脂使用方法（平板计数法、大肠菌群平板计数法、菌落总数平板计数法）

方法一  菌落计数总数之稀释倒平板法
此方法是2010年版国家标准 GB 4789.2-2010中的菌落总数计数方法。
1、称取平板计数琼脂23.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，灭菌完成后，将获得的平板计数琼脂培养基置于45度水浴中备用。
2、样品的稀释及处理。取样品25g或者25ml，溶解于225ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，然后使得样品充分溶解和混匀。此时的样品浓度是稀释了原样品10倍。   
3、10倍梯度稀释样品液。取样品溶解液1 ml，加入9ml 无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，吹打均匀，此时的溶液样品浓度是原始样品的0.01倍。每次吸取上一个样品1 ml，加入到9ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，根据这个方法继续进行样品的连续梯度稀释。
4、 选择2-3个合适的稀释度，吸取该稀释度的1 ml稀释液于无菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。
5、稀释液移入平皿后，及时将凉至45-50 ℃的琼脂培养基(可放置于45℃水浴箱保温) 注入平皿约15-25 mL，并转动平皿使菌液稀释液和琼脂培养基混合均匀。同时将琼脂
培养基倾入加有1 mL无菌生理盐水或者磷酸盐缓冲液的灭菌平皿内作空白对照。  
6、待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。   
7、观察结果并进行计数。30-300个菌落为合适范围，出具菌落总数计数报告。

方法二：菌落总数计数平板涂布法
1、称取平板计数琼脂23.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。
2、待冷却至55°C时倒20ml培养基到90mm无菌培养皿中，冷却后成为可以使用的平板计数平板，待表面干燥后使用。对于酵母和霉菌含量高的样品，则用100mm培养皿，每个培养皿倒入20-25ml培养基。 待琼脂表面干燥后使用。
3、样品的稀释及处理。取样品25g或者25ml，溶解于225ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，然后使得样品充分溶解和混匀。此时的样品浓度是稀释了原样品10倍。   
4、10倍梯度稀释样品液。取样品溶解液1 ml，加入9ml 无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，吹打均匀，此时的溶液样品浓度是原始样品的0.01倍。每次吸取上一个样品1 ml，加入到9ml无菌生理盐水或者无菌磷酸盐缓冲液中，根据这个方法继续进行样品的连续梯度稀释。
5、 选择2-3个合适的稀释度，吸取该稀释度的0. 1 ml或者0.2 ml稀释液于倒好的计数平板中，每个稀释度做两个琼脂平板。
6、使用无菌的玻棒或者其他无菌涂布物品，将稀释液在平板上涂布均匀。   
7、将平板置于36±1℃温箱内培养48±2h。
8、观察结果并进行计数。30-300个菌落为合适范围。出具菌落总数计数报告。