稳转细胞株构建与传代步骤

稳转细胞株构建方法：
慢病毒载体包装慢病毒后感染Hela细胞，用嘌呤霉索筛选得到EGFP过表达多克隆细胞株。收到细胞的处理：根据客户所在地及发货季节，我们可能采用干冰运输的冻存细胞或者常温运输的培养瓶细胞两种不同形式发货。收到细胞后根据细胞运输类型采用下面两种方式操作。

稳转细胞株传代方式:
1、传代前将细胞培养液、PBS和胰蛋白酶温浴到37C。
2、吸去细胞培养液。用PBS漂洗--次。
3、加入适量胰蛋白酶，轻轻晃动细胞瓶，使胰蛋白酶均匀覆盖细胞。吸去胰蛋白酶，将培养瓶放置在细胞培养箱中，37摄氏度消化。在倒置显微镜下观察，看到细胞分开及稍微变圆即可，过度消化可能导致细胞贴壁困难。
4、加入5ml细胞培养基，用吸管轻柔吹打分散细胞。按1:3到1:5接种细胞。

稳转细胞株冻存方法;
1、将细胞培养液、PBS和胰蛋白酶和冻存液温浴到37C。
2、冻存的细胞应为状态好，生长旺盛的细胞。按细胞传代方法消化细胞，用适量细胞培养液终止消化，重悬细胞。
3、室温200g离心10分钟收集细胞，用冻存液重悬细胞，并调节浓度至大约1X10^6个细胞/ml。分装到细胞冻存管。
4、将细胞冻存管放入程序降温盒，-80C过夜。将冻存的细胞转入液氮中。