NaCl在培养基中的作用
钠离子不参与细胞的组成,但仍是微生物发酵培养基的必要成分,钠离子与维持细胞渗透压有关,故在培养基中常加入少量的钠盐,但用量不能过高,否则会影响微生物的生长。
氯离子在一般微生物中不具有营养作用,但对一些嗜盐菌来讲是需要的,在一些产生含氯代谢物的发酵中,除了从其他天然原料和水中带入的氯离子外,还需加入一定量的氯化物补充氯离子。
实验证明,在无机大量元素中,NaCl与维持细胞内外渗透压平衡,K2HPO4在培养基起缓冲剂调节pH值的作用,用量不能过高,否则会影响微生物的生长,一般用量在5%以内。
在固体培养基培养时,其实也是这个道理,细菌在利用基质时能同时吸收NaCl,在体内也能起到类似的作用即维持渗透压的作用。
特别是有的嗜盐菌,需要达到一定的盐浓度才能激活体内的某些酶才能生长正常的。
培养基的配制:
1、配料:在容器中加入少量水,按照配方称取各种药品,加足所需水量(一药一勺,取药后立即盖上瓶盖)。
2、溶解:淀粉溶解:少量冷水调成糊状,加热溶解,特别是加有琼脂的培养基,一定要煮沸,琼脂的熔解温度95-97℃ ,且需要边加热边搅拌以防止烧焦。
3、调PH:用1N的盐酸或1N的 NaOH把培养基调节到所要求的值。
4、过滤:滤纸或棉花进行过滤。
5、分装:一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。
(1)三角瓶
若作静置培养,则100ml培养基/250ml的三角瓶,最多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶,否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞,造成染菌;若作摇瓶培养,则15-20ml培养基/250ml的三角瓶,保证通气良好。
(2)试管分装
液体培养基一般装4-5ml,约试管的1/4高度。
固体斜面培养基一般装3-4ml,约试管的1/5高度。
6、包扎:分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。
7、灭菌:按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。
8、摆斜面:灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的1/2。
9、贮存:培养基在30℃下放置一天,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。
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