葡聚糖凝胶LH-60

葡聚糖凝胶LH-60使用说明书

葡聚糖凝胶LH系列是将葡聚糖凝胶羟丙基化，并且专门适合用于有机溶剂分离嗜脂性分子，天然产物在有机溶剂中的纯化，例如类固醇，萜类化合物，脂质和低分子量肽。
流动相的常用溶剂为：水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷。
上述溶剂的极性依次降低，对带有极性的被分离物而言，保留值和分离度依次递增；同理选用的凝胶柱高可依次降低，流速可以增大（或上样量可以增加，树脂体积在低极性溶剂中明显收缩）。
溶剂的溶解性，极性，沸点，毒性都是要考虑到的，二氯甲烷通常对被分离物质间的极性和碱性差异比较小时采用。甲醇通常对带环状(包括苯环)物质分离采用，葡聚糖凝胶LH-20对环状物质有强烈吸附，同时具备亲水和亲脂双重性质，且被分离物质的极性在分离过程中起着重要作用。

1 填料的准备
（1）葡聚糖凝胶LH-60以干粉形式存在，使用前必须溶胀，在膨胀期间应避免过度搅拌，不要使用磁力搅拌器，溶胀的程度将取决于所使用的溶剂体系，在室温条件下至少溶胀24个小时。
（2）将溶胀好的填料，所有的缓冲液等材料平衡至实验操作温度。

2 装柱
（1）检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。
（2）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。
（3）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
（4）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。
注意：上述装柱方法可用于葡聚糖凝胶LH-20在大多数溶剂中的填充。在一些溶剂中，例如氯仿，葡聚糖凝胶LH-60比溶剂密度小，并在其中漂浮，则需用其他方法。

3 平衡
上样前平衡层析柱至少5-10个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止。

4 上样
样品一定要离心或过滤后（0.45um滤膜）上样。
样品体积应在总柱床体积的1-2％的范围内，视分离情况可以调整，柱高的选择也与分离要求相关，柱长越高，分离效果相应越好，但是，柱高过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制。

5 洗脱
一般来说，流速越低，分辨率越好。

6 再生
通常通过用5-10倍柱体积的洗脱液洗涤柱，如果改变条件，需要用新的洗脱液重新进行平衡操作。

7 保存
未使用的填料，室温密闭保存。使用完的填料，用纯水将盐分彻底冲洗，最后保存在20%乙醇中，4℃保存。

8 注意事项：
（1）上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用0.45um的过滤器过滤。
（2）在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于0.1摩尔。碱会使流速变慢。
（3）不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。