Triton-NH4OH细胞裂解液

【Triton-NH4OH细胞裂解液】自备材料_简介信息

【信息说明】

产品名称：Triton-NH4OH细胞裂解液

规格：100ml/500ml

供应商：远慕生化试剂厂家

分类：细胞组分分离

储存条件：4℃,12个月

用途：裂解缓冲液

主要成分：无菌溶液。主要由0.5% Triton X-100、20mM NH4OH、PBS组成。

【自备材料】

1、胰蛋白酶

2、离心机

3、PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液

4、胎牛血清

【使用方法】

A、组织细胞样本的常规操作

1、制备细胞悬液: 新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，通过适当方法制备成细胞悬液，离心弃上清。

2、裂解：加入3～5倍细胞沉淀体积的Triton-NH4OH Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解。本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。

3、离心： 4℃，离心5min，弃红色上清。如无低温离心机，本步骤亦可在室温下操作。

4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3各一次。

5、洗涤：根据实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。4℃，离心2～3min，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。所加入的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液的量一般应大于细胞沉淀体积的5倍以上。

6、如有必要，重复上述步骤5一次，共洗涤1～2次。

7、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

B、血液样本的常规操作

1、取新鲜抗凝血，离心5min，弃上清。

2、 裂解：加入6～10倍细胞沉淀体积的Triton-NH4OH Lysis Buffer，轻柔吹打混匀，裂解。本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。

3、离心：4℃，400～500g离心5min，弃红色上清。如无低温离心机，本步骤亦可在室温下操作。

4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。

5、洗涤: 根据实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。4℃，离心2～3min，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。所加入的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液的量一般应大于细胞沉淀体积的5倍以上。

6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。

注意： 对于微量或少量的血液样本，可以不用第1步操作，可直接加入10倍血液体积的Triton-NH4OH Lysis Buffer进行第2步操作，并在4℃或室温裂解4～15min。

Triton-NH4OH细胞裂解液

【注意事项】

1、制备细胞悬液时应根据实验需要，不一定要制备成单细胞悬液。

2、后续试验如果是用于细胞培养，操作过程中应注意无菌操作，尽量在超净工作台内操作。

3、离心步骤尽量在4℃离心机上操作。

4、常规步骤与快速步骤的区别在于：常规步骤多了一步洗涤过程的离心，可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好，不需要大体积的离心管;快速步骤少了一次离心过程，洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。

5、离心洗涤后，通常极微量的红细胞不会影响后续的检测。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

【简介说明】

在生物科研领域，经常需要去除红细胞，去除红细胞的方法有多种，如ACK Lysis Buffer、Tris-氯化铵红细胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。Leagene Triton-NH4OH细胞裂解液(Triton-NH4OH Lysis Buffer)经过优化配方，在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(Lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。本裂解液经过滤除菌，经过Triton-NH4OH Lysis Buffer处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。

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