PEG1450溶液(50%,无菌)

【PEG1450溶液(50%,无菌)】操作步骤_注意事项_简介信息

【信息说明】

产品名称：PEG1450溶液(50%,无菌)

供应商：远慕生化试剂厂家

规格：10ml 5×10ml

分类：细胞培养

储存条件：4℃,6个月

用途：聚乙二醇可用作融合剂，以获得生产单克隆抗体的杂交瘤细胞，诱导细胞杂交，同SigmaP7181。

注意事项：无菌溶液，由DPBS(pH7.4)和PEG1450或称聚乙烯醇1450组成,经过滤除菌。

【操作步骤】

1、 如果变成胶冻状,可37~60℃水浴使其变成溶液。

2、单层贴壁细胞:将杂交前体细胞以相同数量(5×104/ml)接种，以适当的培养基培养细胞,待细胞贴壁扩展至汇合成片(80%汇合率)的密度；吸干培养液，加入 PEG1450溶液(50%,无菌)，轻轻转动1min使PEG1450溶液覆盖所有细胞。

3、静置1min：加入完全MEM培养液以稀释PEG1450溶液，吸干净稀释的PEG1450溶液，再用5ml MEM培养液洗涤被PEG处理的细胞；吸干净洗液，加入 MEM培养液，37℃，5%CO2培养过夜。24~48h后先吸去培养液，加入胰酶消化液处理细胞，待细胞消化后吸除胰酶消化液，用HAT选择培养剔除HPRT和TK缺陷细胞。

4、弃上清液：用补加1×HT和1×A的完全培养液重新悬浮细胞；融合后进行异核体分析，杂交前体细胞在4~5天内发生死亡，对于大多数融合前体细胞而言，可见杂交细胞克隆。

5、悬浮细胞：将两种不同亲体的细胞各1ml(约为1×107)混匀，离心以沉淀杂交前体细胞，弃上清液，使之剩余约1ml，手指轻弹管底或手摇离心管使两种细胞混匀并重新悬浮；在离心管中加入1ml PEG1450溶液(50%,无菌)，置于37℃水浴，加入提前37℃预热的含10%胎牛血清的MEM培养液，使PEG1450稀释并停止作用。

6、离心：弃上清液,加入5ml完全MEM培养液以稀释PEG1450溶液，吸干净稀释的PEG1450溶液；用5ml无血清MEM培养液，手摇离心管重悬细胞(不要破坏细胞)，1000g离心5min，弃上清液,重复1次该步骤。

7、加入含有胎牛血清的HAT选择培养基，混匀；将细胞悬液用培养液稀释至5×104/ml，接种于96孔板，37℃ 5%CO2孵育过夜24~48h后选出融合细胞。

【注意事项】

1、 应注意无菌操作，避免被微生物污染。

2、 PEG1450溶液较为粘稠时，可37~60℃水浴使其变成溶液。

3、 体外培养的单层贴壁细胞或悬浮细胞均可做融合，但成功概率较大的是单层贴壁细胞。

4、 如需HAT选择系列产品，可选择Leagene A Media Supplement(50×)、HT MediaSupplement(50×)、HAT Media Supplement(50×)。

【简介说明】

PEG1450溶液(50%,无菌)主要由PEG1450(CAS号25322-68-3)、磷酸盐等组成，其作用原理使能够改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，两细胞接口处在双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用下，细胞发生融合。
PEG1450溶液(50%,无菌)可用作融合剂，以获得生产单克隆抗体的杂交瘤细胞，诱导细胞杂交，仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。

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