PEG1500溶液(50%,无菌)

【PEG1500溶液(50%,无菌)】说明

【信息说明】

产品名称：PEG1500溶液(50%,无菌)

供应商：远慕生化试剂厂家

规格：10ml 5×10ml

分类：细胞培养

储存条件：4℃,6个月

用途：聚乙二醇可用作融合剂,以获得生产单克隆抗体的杂交瘤细胞,诱导细胞杂交，同sigma10783641001。

注意事项：无菌溶液，由HEPES和PEG1500或称聚乙烯醇1500组成,经过滤除菌。

【简介说明】

PEG1500溶液(50%,无菌)可用作融合剂，以获得生产单克隆抗体的杂交瘤细胞，诱导细胞杂交，该试剂同sigmaP7181产品，经严格无菌处理，仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。

聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)有众多品种，常见的有PEG400、PEG1500、PEG4000、PEG6000、PEG8000等，聚乙二醇系列产品无毒、无刺激性，味微苦，具有良好的水溶性，并与许多有机物组份有良好的相溶性，具有优良的润滑性、保湿性、分散性、粘接剂、抗静电剂及柔软剂等。

分子量200～600者常温下是液体，分子量在600以上者就逐渐变为半固体状，随着平均分子量的不同，性质也有差异。从无色无臭粘稠液体至蜡状固体。随着分子量的增大，其吸湿能力相应降低。其中PEG4000和PEG6000常用于促进细胞融合或原生质体融合并有助于生物体(如酵母菌)在转化中摄入DNA。

【操作步骤】

1、如果变成胶冻状,可37~60℃水浴使其变成溶液。

2、单层贴壁细胞:将杂交前体细胞以相同数量(5×104/ml)接种,以适当的培养基培养细胞,待细胞贴壁扩展至汇合成片(80%汇合率)的密度。

3、吸干培养液,加入PEG1500溶液(50%,无菌),轻轻转动1min使PEG1500溶液覆盖所有细胞。

4、静置1min,加入5ml完全MEM培养液以稀释PEG1500溶液,弃上清液，用补加1×HT和1×A的完全培养液重新悬浮细胞。

5、融合12~24h后进行异核体分析，杂交前体细胞在4~5天内发生死亡，对于大多数融合前体细胞而言，10~14天可见杂交细胞克隆。

6、悬浮细胞：将两种不同亲体的细胞各1ml(约为1×107)混匀，离心以沉淀杂交前体细胞，弃上清液，使之剩余约1ml，手指轻弹管底或手摇离心管使两种细胞混匀并重新悬浮。

7、1000g离心，弃上清液，加入完全MEM培养液以稀释PEG1500溶液，吸干净稀释的PEG1500溶液；用无血清MEM培养液，手摇离心管重悬细胞(不要破坏细胞)，1000g离心5min，弃上清液，重复1次该步骤。

8、加入含有20%的胎牛血清的HAT选择培养液，混匀，将细胞悬液用培养液稀释至5×104/ml,接种于96孔板(每孔0.1ml)或其他器皿中，37℃5%CO2孵育过夜后选出融合细胞。

【注意事项】

1、应注意无菌操作，避免被微生物污染。

2、PEG1500溶液较为粘稠时，可37~60℃水浴使其变成溶液。

3、体外培养的单层贴壁细胞或悬浮细胞均可做融合，但成功概率较大的是单层贴壁细胞。

4、如需HAT选择系列产品，可选择LeageneAMediaSupplement(50×)、HTMediaSupplement(50×)、HATMediaSupplement(50×)。

5、请严格按照PEG1500溶液(50%,无菌)说明书上的要求进行规范化操作。

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