维生素B1检测试剂盒(荧光光度法)

产品名称：维生素B1检测试剂盒(荧光光度法)
规格：50T
分类：生化检测
储存条件: 4℃,避光,6个月
用途：定量检测血清、血浆、动植物组织等样品中的维生素B1(硫胺素)含量。
注意事项：维生素B1(硫胺素)在碱性溶液中,被氧化成蓝色荧光化合物硫色素,在紫外线下能发出荧光。激光波365nm发射光波435nm检测荧光。

产品简介:
维生素B1(VitaminB1)又称硫胺素，属于水溶性维生素，在有氧化剂存在时容易被氧化产生脱氢硫胺素，后者在有紫外光照射时呈现蓝色荧光。
维生素B1检测试剂盒(荧光光度法)是利用VitaminB1水溶液在碱性盐溶液中能被氧化成蓝色的硫色素(一种荧光化合物)，在紫外线下硫色素发出荧光，在激发波长365nm，发射波长435nm，在没有其他荧光物质干扰时荧光强度与硫色素的浓度呈正比，可定量检测维生素B1的含量，如果样品中存在干扰物质，可用沸石吸附VitaminB1，以便去除待测样品中干扰荧光测定的杂质。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、蒸馏水
2、pH计
3、离心管或试管
4、正丁醇
5、荧光光度计

操作步骤(仅供参考):
1、稀释组织匀浆液：按组织匀浆液(10×):蒸馏水=1：9的比例稀释，获得1×组织匀浆液。
2、稀释标准品：取适量的VitaminB1标准(100μg/ml)，按VitaminB2标准(100μg/ml)：蒸馏水=1：99稀释成VitaminB1标准(1μg/ml)，4℃避光保存。
3、制备亚硫酸盐工作液：取一支试剂(I)-亚硫酸盐100mg粉末，充分溶解于0.5ml蒸馏水中配制成200mg/ml的亚硫酸盐工作液，即配即用。
4、(选做)制备样品：取待测材料如麦麸等，准确称量2~5g，加入研磨器内，加入少量1×组织匀浆液，研磨碎，再次用1×组织匀浆液研磨，最后一并倒入50ml离心管，补充1×组织匀浆液至25ml，充分混匀，沸水中孵育30min，冷却至室温，用样品校正液调节pH至4.5，3500g离心10min，取上清加入2g沸石，振摇30min，弃液，蒸馏水清洗沸石2次，弃洗液，加入2.5ml样品洗脱液搅拌沸石，洗脱2~3次，将洗脱液合
5、VitaminB1氧化：按下表操作，注意避光操作。

加入物(ml)	空白管	测定管	标准空白管	标准管
VitaminB1标准(1μg/ml)	-	-	2.5	2.5
样品净化液	2.5	2.5	-	-
VitaminB1氧化液	1.5	0.9	1.5	0.9
VitaminB1检测液	-	0.6	-	0.6
振摇15s
正丁醇	5	5	5	5
剧烈振摇90s，静置分层，吸取下层溶液丢弃；上层溶液加入1.5g硫酸盐 混匀使脱水。

 
计算：
VitaminB1含量(mg/100g)=(A测定-A空白)×S×N×100/｛(A标准-A标准空白)×m×1000｝
式中：A测定=测定管的荧光值
A空白=空白管的荧光值
S=标准管中VitaminB1含量（μg）
N=稀释倍数
A标准=标准管的荧光值
A标准空白=标准空白管的荧光值
m=样品的质量(g)
注意事项：
1、在上述操作中，要严格避免VitaminB1受到阳光直射。
2、待测样品如不能及时测定，应置于2~8℃保存，3天内稳定。
3、如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

并，并用样品洗脱液定容至10ml，即为样品净化液。
VitaminB1氧化：按下表操作，注意避光操作。